SARS-CoV-2检测试剂盒(ORF1ab和N基因)

产品货号：

MT015819

中文名称：

英文名称：

SARS-CoV-2 LAMP-TaqMan Kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

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本试剂盒采用多重探针法LAMP扩增技术，配合特异性的双标荧光探针进行新型冠状病毒（SARS-CoV-2）检测。试剂盒采用单管三重设计，靶标基因ORF1ab、N基因和人内参β-actin基因。

技术指标

在单管中进行三重LAMP扩增，分别靶向ORF1ab（FAM）和N基因（FAM），防止突变造成的检测脱靶。内参β-actin（ROX）用于扩增和采样质控(内参引物不能扩增人基因组DNA)。
在直接使用拭子浸泡液的情况下（不进行核酸提取），有效灵敏度：200个病毒/拭子。在体外转录的RNA测试中，无论ORF1ab或N基因，灵敏度均为单copy。人Total RNA可检测到0.1ng。
无需核酸纯化步骤，可以直接使用病毒灭活后的拭子浸泡液。在25μL的LAMP反应体系中，可采用5μL的拭子浸泡液。
反应速度快，恒温65℃条件下，30分钟内完成检测。在每个检测管中含有100个病毒以上的样本，10分钟内完成检测。
采用特异性的双标荧光探针，准确性100%，无假阳性。
试剂盒的靶标区域
N基因靶标序列如下：
CAACATTGCCAAAAGGCTTCTACGCAGAAGGGAGCAGAGGCGGCAGTCAAGCCTCT
TCTCGTTCCTCATCACGTAGTCGCAACAGTTCAAGAAATTCAACTCCAGGCAGCAGTA
GGGGAACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCAATGGCGGTGATGCTGCTCTTGCTTTGC
TGCTGCTTGACAGATTGAACCAGCTTGAGAGCAAAATGTCTGGTAAAGGCCAACAAC
AACAAGGCCAAACTGTCACTAAGAAATCTGCTGCTGAGGCTTCTAAGAAGCCTCGGC
ORF1ab基因靶标序列如下：
TCATCAAACGTTCGGATGCTCGAACTGCACCTCATGGTCATGTTATGGTTGAGCTGGT
AGCAGAACTCGAAGGCATTCAGTACGGTCGTAGTGGTGAGACACTTGGTGTCCTTGT
CCCTCATGTGGGCGAAATACCAGTGGCTTACCGCAAGGTTCTTCTTCGTAAGAACGG
TAATAAAGGAGCTGGTGGCCATAGTTACGGCGCCGATCTAAAGTCATTTGACTTAGGC
GACGAGCTTGGCACTGATCCTTATGAAGATTTTCAAGAAAACTGG

检测样本的使用说明：

拭子样品
- 咽拭子、鼻腔拭子采集完毕后，将拭子棉签部分放入到含有0.3mL本试剂盒提供的IsoAmp快速核酸释放剂中（可在1.5mL EP管，或2mL病毒保存管中操作）。
- 在裂解液覆盖棉签的情况下，漩涡混合10-20s，使棉签上的病毒和人体细胞从棉签上脱落。
- 上述裂解产物可以直接作为模板进行检测，或在56℃条件下进行病毒灭活后进行检测。未使用完毕的病毒液可-80℃长期保存病毒核酸，也可以用于病毒的核酸纯化。
该试剂盒可同样适用于纯化的核酸样本，取5μL核酸样品即可用于检测。

仪器和程序设置
恒温扩增的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），荧光通道选择FAM和ROX双通道。
步骤1：65℃ 10s
步骤2：65℃ 50s收集信号，循环18～25次，即总反应时间为18～25min（初次实验设置25min，不同的机型所需时间
可能会有所区别，在ABI的Q1和V7机型中18min可完成单copy的检出）。
注意：本试剂盒无需热盖加热，在使用定量PCR进行检测时，可关掉PCR仪的热盖功能，以缩短检测时间。
配置反应体系
2.1向检测反应管中加入10μL的SARS-CoV-2 IsoAmp3 Solution A、10μL的SARS-CoV-2 IsoAmp3 Solution B。
2.2向检测反应管中加入5μL的待检测病毒液[或N-O基因阳性标准品(阳性对照)，或IsoAmp快速核酸释放剂(阴性对照)]。
2.3反应体系配好后，混匀2-5s。并短暂离心，置于荧光定量PCR仪上进行反应即可。

结果判读
3.1结果判读的成立条件：

3.2检测样本结果判读：

3.3典型的检测结果

阳性样本(10 copies)	阴性样本（5μL咽拭子浸泡液）
红色线为FAM信号，表明存在SARS CoV-2核酸分子	FAM无信号，ROX有信号，表明不含有SARS-CoV-2核酸分子

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